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  • 固相萃取儀前期處理步驟

    發布于 2015/07/28閱讀(1339)來源 hj1

    摘要

    固相萃取儀前期處理步驟

    內容

    固相萃取儀前期處理步驟

    選擇SPE 小柱或濾膜
    首先,根據待測樣品的性質,選擇對其有較強保留能力的固定相,若待測樣品帶負電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或濾膜的大小與規格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內樣品, 一般應選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
    活化
    萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使SPE 填料保持濕潤, 因為填料干燥會降低樣品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易被水潤濕;然后再加入水或緩沖液沖洗,創造和樣品溶劑相容的環境并提高回收率。
    上樣
    一般可采取以下四種方法:
    (1) 用0.1mol/L 酸或堿調節, 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃??;
    (2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃?。?br /> (3) 用酸或無機鹽沉淀蛋白質后取上清液, 調節pH 值后萃?。?br /> (4) 超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結合。
    淋洗
    反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml。
    洗脫
    應選用5~10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離, 可調節pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調節pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調節pH值使其在HPLC分析中達到最佳分離效果。在洗脫過程中應減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。

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