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  • 紫外分光光度法測定紫云英蜜中總酚的含量

    發布于 2011/11/28閱讀(1789)來源 zxj標簽 分光光度計

    摘要

    紫外分光光度法測定紫云英蜜中總酚的含量

    內容

    紫外分光光度法測定紫云英蜜中總酚的含量
     
    目的:建立紫云英蜜中總酚含量測定方法。方法:采用Folin酚法,樣品經福林試劑顯色反應后,紫外可見分光光度計測定其總酚含量。結果:總酚在2.03~8.04μg·mL-1內線性良好,r=0.9997,且平均回收率為102.42%,RSD=2.64%(n=5)。結論:該方法準確,簡便,重現性好,專屬性強,可有效地控制紫云英蜜的質量。
    紫云英蜜又名紅花草蜜或草子蜜,具有大自然清新宜人的草香味,甜而不膩,鮮潔清甜,色澤為淺琥珀色。富含多糖、多酚、氨基酸、維生素、微量元素等多種營養成分,長期飲用可補氣血,健脾胃,增強抗病能力,強身健體。且其中的多酚酸具有抗病原微生物、抗炎癥、抗變態反應、抗心血管疾病和抗氧化等作用[1,2]。為了控制產品質量,我們采用Folin酚法對貴州不同產地的紫云英蜜中總多酚含量進行了研究。
    1儀器與試藥
    1.1儀器
    紫外可見分光光度計(本昂儀器);超聲波清洗儀(本昂儀器);恒溫水浴鍋(本昂儀器)。
    1.2試藥
    原兒茶酸對照品(批號:110809200503);鎢酸鈉,磷鉬酸,85%磷酸,N a2CO3,以上試劑均為分析純;水為蒸餾水;
    1.3福林試劑的配制[3]:
    稱取鎢酸鈉40g,磷鉬酸8g和85%磷酸20mL,溶于300ml蒸餾水,煮沸加熱回流2h,冷卻,稀釋至400mL,置于棕色瓶中保存。
    1.4Na2CO3溶液的配制
    稱取15gNa2CO3,溶于200mL蒸餾水中,即為75g·L-1Na2CO3溶液。
    2方法與結果
    2.1對照品溶液的制備
    原兒茶酸對照品的配制:稱取原兒茶酸對照品15.80mg于50mL容量瓶中,蒸餾水溶解并定容,搖勻,備用,濃度為316μg·mL-1。
    2.2供試品溶液的制備
    取同一批樣品,精密稱定,置于50mL容量瓶中,超聲使溶,過濾,取20mL續濾液定容成50mL,搖勻,備用。
    2.3測定方法
    精密吸取適量樣品溶液1mL于10mL帶塞離心管中,加入2.5mL福林試劑,放置5min,再精密加入Na2CO3溶液2mL,50℃水浴保持5min,再取出室溫放置2h,于760nm左右測定吸光度值。
    2.4標準曲線的制備
    從原兒茶酸標準儲備液中分別吸取1,1.5,2,2.5,3,3.5mL于25mL容量瓶中,蒸餾水稀釋定容,搖勻,濃度分別為12.64μg·mL-1,18.96μg·mL-1,25.28μg·mL-1,31.60μg·mL-1,37.92μg·mL-1,44.24μg·mL-1,分別從中精密吸取1mL,按2.3測定方法反應,測定吸光度值。以終濃度為橫坐標,吸光度值為縱坐標,得回歸方程為Y=0.0932X-0.0315,r=0.9997。結果表明總酚在12.64μg·mL-1~44.24μg·mL-1范圍內線性良好。
    2.5精密度試驗
    取同一份對照品按上述反應后連續測定5次,吸光度值RSD=0.386%。結果表明儀器精密度良好。
    2.6樣品吸光度值穩定性試驗
    按2.2供試品溶液制備方法制備樣品液,并按2.3測定方法反應后,每隔5min測定一次,觀察吸光度值變化,結果1h內的吸光度值RSD=1.42%,結果見圖1。結果表明樣品顯色后在1h內較穩定。
    2.7重現性試驗
    取同一批樣品,平行5份,精密稱定,按供試品溶液法制備,并按2.3測定法反應。結果表明,樣品的平均含量為2.154mg·g-1,RSD=3.43%。結果表明方法重現性良好。
    2.8加樣回收率試驗
    取同一批樣品,精密稱定,精密加入337μg·mL-1原兒茶酸對照品2mL,按供試品溶液法操作,并按2.3測定樣品中總酚的含量,結果表明,其回收率為102.42%,RSD=2.64%,數據見表1。表1總酚加樣回收率試驗結果(、略)
    2.9樣品含量測定
    分別精密稱取貴州不同產地的樣品,每批平行取5份,按2.3測定方法操作,測定每批樣品中總酚平均含量。結果見表2。表2不同批次樣品總酚含量(略)
    3討論
    植物多酚的測定方法有多種[3,4],曾考察普魯士藍法[5]、重氮比色法[6]等,均因為方法顯色不穩定或方法步驟復雜而未采用。而Folin酚法實驗操作較簡單,且結果穩定可靠,故選用該方法作為紫云英蜜中總酚含量測定方法。
     

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