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  • Waters高效液相色譜儀氨基酸分析標準標準操作規程

    發布于 2011/08/22閱讀(2432)來源 zxj標簽 液相色譜儀

    摘要

    Waters高效液相色譜儀氨基酸分析標準標準操作規程

    內容

    Waters高效液相色譜儀氨基酸分析標準標準操作規程
    1.設備和供應:
    1.1Waters breeze系列高效液相色譜
    1.2色譜拄
    1.3進樣器
    1.4渦旋攪拌器
    1.5微量移液器及若干吸頭
    1.6烘箱(55℃)
    1.7AccQ·TagA衍生管
    2.材料和試劑:
    2.1AccQ·TagA濃液
    2.2CH3CN
    2.3AccQ·Fluor衍生劑
    2.4AccQ·Fluor硼酸鹽緩沖液
    2.5高純水
    3.操作程序:
    3.1色譜條件:
    3.1.1色譜柱:AccQ·Tag column
    3.1.2柱溫:37℃

    3.2試液配制:
    3.2.1流動相:
    A液:按1:10(v/v)將AccQ·TagA濃液與高純水稀釋,脫氣即得。
    B液:按60:40(v/v)將CH3CN與高純水稀釋,脫氣即得。
    3.2.2標準樣品配制:用微量移液器移取100ul氨基酸標準品,加0.9ml高純水稀釋,混勻,備用。取稀釋液10ul加入衍生管,加AccQ·Fluor硼酸鹽緩沖液70ul,在渦旋攪拌下加入20ulAccQ·Fluor衍生劑,用封口膜封好,放入55℃烘箱中保溫10分鐘。取出,即可用于進樣。
    3.2.3供試品配制:按各供試品項下要求對樣品進行稀釋,照“標準樣品配制”方法,自“取稀釋液10ul加入衍生管”同法操作。
    3.3系統適用性試驗:
    3.3.1色譜柱理論塔板數:取標準樣品10ul注入進樣孔,記錄色譜圖,兩出主要成分的保留時間Tr和半峰高(W2/h)。按① 計算色譜柱的理論塔板數.如果測得的理論塔板數低于7000應改變色譜柱的某些條件,使理論塔板數達到要求。
    3.3.2分離度:記錄色譜圖中相鄰兩峰的保留時間tr1和tr2,以及此相鄰兩峰的峰寬W1、W2。按②計算分離度,除另有規定外分離度應大于1.5。
    3.4樣品測定:分別取標準樣品與供試品,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法計算樣品中氨基酸含量。
    3.5實驗完畢后,用水清洗系統,然后用流動相沖洗色譜注,方可關機
    4.其它諸如高分子量物質含量、其它物質含量和鑒別同法測定,并依據藥品的不同國家藥品標準做相應調整,諸如,分離柱類型,流動相類別等。
    5.附錄:
    5.1做好洗脫液的脫氣處理,防止泵起動后壓力波動大流速不穩定。
    5.2灰塵或流通池的堵塞是檢測器出現故障的常見原因,在分析完高濃度的樣品之后,要使用大量的流動相將其徹底沖出流通池。如果使用緩沖溶液作流動相,分析完后務必用水沖洗管路,因為緩沖溶液蒸發后會產生結晶,而引起管路堵塞。


     

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