HPLC系統標準操作規程(SOP)

1. 目的：規范高效液相色譜儀的使用。規范色譜柱的使用。
2．范圍
適用于高效液相色譜儀的維護使用。
3．職責
儀器使用者對本規程的實施負責。
4．規程
4.1 系統組成：
本系統由LC-10ATvp溶劑輸送泵、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、N2000色譜數據工作站、色譜柱和電腦等組成，另外還包括打印機、不間斷電源等輔助設備。
4.2 準備
4.2.1 準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）。
4.2.3 配制樣品和標準溶液，用合適的0.45μm濾膜過濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。
4.3 開機：
接通電源，依次開啟不間斷電源、泵、檢測器，待泵和檢測器自檢結束后，打開打印機、電腦顯示器、主機，最后打開色譜工作站。
4.4 參數設定
4.4.1 波長設定：在檢測器顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需波長值，按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出到初始屏幕。
4.4.2 流速設定：在泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。
4.5 更換流動相并排氣泡
4.5.1 將管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中；
4.5.2 逆時針轉動A/B泵的排液閥90-180°，打開排液閥；

4.6 平衡系統
4.6.1打開“在線色譜工作站”軟件，輸入實驗信息并設定各項方法參數后，按下“數據收集”頁的 [查看基線] 按鈕。
4.6.2. 按泵的[pump]鍵， pump指示燈亮。用檢驗方法規定的流動相沖洗系統。
4.6.3 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應予以排除。
4.6.4 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過0.5MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5重復操作。
4.6.5 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統已達到平衡狀態，可以進樣。
4.7 進樣
4.7.1 進樣前按檢測器[zero]鍵調零，按軟件中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。
4.7.2 用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.8．色譜柱的使用
4.8.1 色譜柱選擇：根據擬定的質量標準選擇C8、C18、SIL等類型，一般首選短柱（可節約時間及試劑），遇到不能分離情況可考慮長柱。
4.8.2 色譜柱使用：對色譜柱說明仔細閱讀；使用相同類型預柱；應保證流動相PH在色譜柱適應范圍內（ph 2-8）；保證柱壓在可接受范圍內（小于18MKP）。
4.8.3色譜柱清洗：
反相柱（C8、C18）
流動相含鹽（可將加酸、加三乙胺等情況并入），以乙腈－水（5：95）沖洗30倍柱體積以上（可視具體情況增加沖洗量）。然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
流動相不含鹽 以流動相沖洗20倍柱體積以上，然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
流動相為添加離子試劑：以乙腈－水（5：95）沖洗50倍柱體積以上（可視具體情況增加沖洗量）。然后以甲醇沖洗30倍柱體積以上。使用離子試劑色譜柱一般為專用，不建議用作其他項目測定。
正相柱
流動相含鹽 以不含鹽流動相沖洗30倍柱體積以上，再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動相極性與正己烷有較大差異，可在流動相沖洗后，以異丙醇低速沖洗進行過渡（注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min）。
流動相不含鹽 以流動相沖洗20倍柱體積以上，再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動相極性與正己烷有較大差異，可在流動相沖洗后，以異丙醇低速沖洗進行過渡（注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min）。
4.8.4色譜柱保養
色譜柱不使用時，務必將兩端密封。
對色譜柱不得有劇烈的震動或敲打等行為。
對于長期未使用的色譜柱，定期對其封存溶劑進行置換。