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  • 高效液相色譜法測定紅豆杉組織培養物中sinenxans含量方法

    發布于 2011/03/03閱讀(3615)來源 zxj

    摘要

    Sinenxan A、sinenxan B和sinenxan C均從紅豆杉(Taxus chinensis)組織培養物中分離得到其結構由NMR與MS確定,其純度經HPLC測定均達到99.0%以上。

    內容

    流動相:甲醇—乙腈—水(651520);流速:1.0mL/min;檢測波長:227nm;積分儀衰減:2;紙速:0.1cm/min;靈敏度AUFS0.02;柱溫:室溫。4 樣品液的制備 收獲待測的培養物,在60℃以下烘干至恒重,研細,過40目篩為樣品。
    精密稱取1.0g,以石油醚(6090)—丙酮(520)超聲波提取30min,過濾。濾渣以丙酮洗滌3次。合并濾液,濃縮至干得粗提物。以1.0mL甲醇溶解,吸取50μL加于Sep-Pak C18預柱端。分別以水、70%甲醇和90%甲醇各4mL洗脫。收集90%甲醇洗脫液,蒸干溶劑,以甲醇定容1mL為樣品液。5 對照品的保留時間吸取sinenxan Asinenxan Bsinenxan C的對照品混合溶液10μL進樣.

    回收率試驗 精密稱取1.0g已知含量的樣品,按照“樣品液的制備”項下“以石油醚(6090)—丙酮(520)超聲波提取30min”至“濃縮至干得粗提物”的方法操作,精密吸取10μL對照品混合溶液,加入所得粗提物中,按照“樣品液的制備”項下“以1.0mL甲醇溶解”至“以甲醇定容1mL為樣品液”的方法操作,制成回收試驗樣品液。

    精密吸取回收試驗樣品液2μL進行測定,所得結果代入回歸方程,計算回收率。sinenxan A、sinenxan Bsinenxan C的平均回收率(n=3)分別為:(104.4±0.41)%、(103.7±0.47)%(99.04±0.52)%。8 樣品測定 精密吸取按“樣品液的制備”項下方法制備的樣品液2μL進行測定,所得結果代入回歸方程,計算含量。每個樣品進樣2次,以平均數為測定結果。

    討論
    9.1
    流動相的選擇 根據文獻報道[2]及作者實驗總結,運用HPLC進行紫杉烷類成分的分析測定,流動相的組成以甲醇—乙腈—水為較好,其中,乙腈與水的比例決定著色譜峰的形狀及分離效果,甲醇決定著色譜峰的保留時間(tR)。針對本文sinenxans的測定,選定配比為651520的甲醇—乙腈—水作為最佳流動相。若減小甲醇的比例,將會延長樣品的測定時間,且較后出峰的sinenxan C會出現拖尾現象;如增大甲醇的比例,sinenxan各色譜峰的保留時間均可顯著縮短,然而在進行樣品分析時,由于存在其他成分色譜峰的干擾,會影響測定結果的準確度。
    9.2
    被測組分的含量水平會因培養物樣品之間存在較為顯著的差異而有所不同??筛鶕唧w情況調整樣品液的濃度和/或進樣量,以滿足樣品的測定要求,得到準確的測定結果

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