高效液相色譜法測定石杉堿甲膠囊的含量

摘要建立了測定膠囊中石杉堿甲含量的反相高效液相色譜法。SpherisorbC18分析柱，以甲醇—水(50∶50，含0.02%的三乙醇胺)作為流動相，在310nm波長檢測。石杉堿甲在0.2～50μg/mL濃度范圍線性關系良好。最小檢測量為1.2ng，方法重現性好，平均回收率為99.59%(n=6)，RSD=1.6%。本法操作簡便、精確。
　　
　　石杉堿甲是我國首先分離得到的一種新生物堿，是一種強效的可逆性AChE抑制劑，能改善老年性記憶功能減退，可顯著提高AD患者的記憶、認知和行為功能，無明顯不良反應，是治療阿耳茨海默病的一個有前景的藥物。石杉堿甲片劑的含量測定采用提取—紫外分光光度法，操作繁復，結果往往偏低。本文采用高效液相色譜法測定了石杉堿甲的含量，表明方法簡便、準確，重現性好，結果令人滿意。
　　
　　1、儀器與試藥
　　
　　高效液相色譜儀(本昂儀器P1201)；紫外檢測器；甲醇(HPLC級)；三乙醇胺(AR級)；重蒸餾水；石杉堿甲對照品(純度為99.6%)及膠囊(寧波立華制藥有限公司)。
　　
　　2、高效液相色譜定量方法和結果
　　
　　2.1色譜條件色譜柱：SpherisorbC18，250mm×4.6mm，10μm；流動相：甲醇—水(50∶50)，含0.02%的三乙醇胺；檢測波長：310nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL/min；進樣量：20μL。
　　
　　2.2溶液的配制石杉堿甲對照品溶液：精密稱取80℃烘至恒重的石杉堿甲對照品10mg，置100mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，精密吸取5mL，置100mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，即得石杉堿甲對照品溶液。取石杉堿甲膠囊20顆，內容物研勻。取約200mg精密稱定，置10mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，過濾(0.45μm)，備用，即得供試品溶液。
　　
　　2.3線性范圍精密吸取石杉堿甲對照品液，加0.01mol/L鹽酸溶液配制成0.2、0.4、1、2、4、8、10、25、50μg/mL的溶液，按上述色譜條件，分別進樣20μL，以石杉堿甲對照品濃度(μg/mL)為橫坐標，主峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得標準曲線：
　　
　　Y＝7784.9X-178.0r＝0.99998
　　
　　線性范圍0.2～50μg/mL。
　　
　　2.4回收率測定按處方量稱取空白輔料約200mg，精密加入石杉堿甲對照品約50μg(一式6份)，置10mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液，溶解并稀釋至刻度，經0.45μm濾膜過濾，進樣20μL。計算回收率和相對標準偏差。結果，石杉堿甲平均回收率為99.59%，RSD＝1.6%(n=6)。
　　
　　2.5空白試驗僅加入輔料成分，按回收率試驗項下操作，結果在對照品的出峰時間不出現色譜峰。輔料對主藥測定無干擾。
　　
　　2.6重現性試驗按樣品的測定方法測定同一批樣品，結果含量平均值為標示量的97.15%(n=6)，RSD＝1.2%。
　　
　　2.7穩定性試驗精密吸取供試品溶液20μL，分別于0、1、2、4d時進樣測定其峰面積，計算，RSD＝0.8%，說明樣品穩定性好。
　　
　　2.8樣品的測定取供試品溶液和石杉堿甲對照品溶液，分別精密量取上述2種溶液20μL，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品(r)和供試品(x)待測成分的峰面積，按外標峰面積法計算含量。測定3批樣品，結果為標示量的95.56%～97.15%。
　　
　　3、討論
　　
　　3.1流動相的選擇石杉堿甲為生物堿成分，選擇以甲醇—水系列為流動相，經試驗甲醇—水各種配比(90∶10、80∶20、50∶50)，在30min內均不出峰，而在甲醇—水(50∶50)中加入少許三乙醇胺，使流動相呈弱堿性，則獲得適宜的保留時間。
　　
　　3.2檢測波長的確定取石杉堿甲對照品，以流動相為溶媒，制成適宜濃度，于紫外200～400nm掃描，結果在310nm處有最大吸收，故確定檢測波長為310nm。
　　
　　3.3小結實驗表明，本法測定石杉堿甲膠囊含量，樣品穩定，重現性好。并且線性范圍廣、靈敏度高，可用于該制劑溶出度、含量均勻度測定。本法中輔料對測定無干擾，無需樣品預處理，結果準確可靠。