實驗方法原理：

主要是蛋白胨和牛肉粉用來提供細菌生長所需的碳源、氮源、氨基酸以及維生素。氯化鈉維持培養基中的滲透壓，瓊脂用做凝固劑。脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I，為嗜血桿菌屬的生長提供特殊營養。

巧克力平板培養基還能夠培養其他細菌，主要的原因是血液中有V、X因子，這兩種因子是位于紅細胞中的，一般細菌不能利用，輕微的加熱（一般為75~85攝氏度左右）使紅細胞破壞釋放到細胞外方可利用。