目的建立龍葵中澳洲茄胺的高效液相色譜（HPLC）檢測方法。方法采用甲醇酸水超聲提取龍葵生物堿，在回流條件下對生物堿苷進行酸性水解，得到相應的澳洲茄胺。然后進行高效液相色譜檢測，色譜條件：色譜柱為DiamonsilC18色譜柱（250mm×4.6mm），乙腈-0.05%七氟丁酸（30∶70）體系為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為210nm。結果龍葵生物堿獲得了良好的基線分離；澳洲茄胺的線性范圍為102～612μg·ml-1（r=0.9999）；加樣回收率超過96.0%，RSD為3.35%（n=6）。結論該方法簡單快速，準確可靠，可作為龍葵藥材及其制劑的質量控制方法。該方法也為龍葵質量標準的制定及進一步的藥效學研究提供了可靠的數據和方法學平臺。

       龍葵SolanumnigrumL.為茄科（Solanaceace）植物龍葵一年生草本植物，別名野葡萄、老鴉眼睛草、苦菜、苦葵［1］。龍葵全草均可入藥，其生物活性成分主要包括甾體類生物堿、多糖、維生素A和維生素C等。其中，甾體類生物堿具有抗腫瘤活性，龍葵也因此被列為十大抗腫瘤中草藥之一［2～5］。

       龍葵生物堿主要以生物堿苷的形式存在［5］，由于苷元與生物堿苷存在對應關系，因此以苷元來定量龍葵生物堿是常用的分析手段。澳洲茄堿（solasonine）和澳洲茄邊堿（solamargine）是龍葵的主要活性成分，它們水解后的苷元是澳洲茄胺（solasodine）（見圖1）。文獻常采用測定澳洲茄胺來定量龍葵生物堿，包括重量法、電位滴定法、比色法和薄層掃描法［6］。但是，這些方法操作繁瑣，準確度差。近年來，高效液相色譜憑借其優異的分離分析能力已成為中藥這一復雜體系的強有力的分析工具。最近，蔣新宇等［7］基于澳洲茄胺的分析，提出了一種龍葵中甾體類生物總堿的高效液相色譜檢測方法。但該方法側重于龍葵生物堿的提取、水解過程，其高效液相色譜檢測過程仍有待進一步優化。本研究通過對提取分離各環節的實驗優化和嚴格的方法學驗證，提出了一種簡單可靠的澳洲茄胺的高效液相色譜定量方法。

       1器材與方法1.1儀器與試劑Agilent1100Series高效液相色譜儀；電子天平（MettlerAE240，德國）；KQ318T型超聲清洗器（昆山市超聲波儀器公司）；高速粉碎機（FW-100型，北京市永光明醫療器械廠）；pHS-3C酸度計（上海雷磁分析儀器公司）。

       澳洲茄胺（Solasodine）對照品購自Sigma-alderich公司（圣路易斯，美國）；流動相用的甲醇和乙腈均為色譜純，其余試劑為分析純。全程使用二次蒸餾水。

       龍葵藥材全草購自南昌匯仁堂藥店。龍葵果實由江西樟樹某藥材經銷商友情提供，經常規植物分類學方法鑒定為茄科（Solanaceace）植物龍葵的果實。

       1.2色譜條件XBP C18色譜柱（250mm×4.6mm）。流動相為乙腈-0.05%七氟丁酸（30∶70）；流速1.0ml/min；檢測波長210nm；進樣量20μl。

       1.3溶液的制備1.3.1對照品溶液精密稱取對照品適量，加甲醇溶解，所得澳洲茄胺的濃度為1.02mg/ml。

       1.3.2樣品溶液精密稱取龍葵藥材2g，加甲醇20ml，1.0M鹽酸10ml，超聲提取40min，收集上清液，濾過。向濾液中續加6M鹽酸5ml，回流水解1h。趁熱揮去回流液中的甲醇，以氨水調pH值至10，繼以醋酸乙酯萃取兩次。分取醋酸乙酯層，揮干溶劑，殘渣以適量甲醇溶解，轉入10ml容量瓶，以甲醇稀釋至刻度，分析前以0.45μm濾膜濾過。對龍葵果實的樣品溶液，在進樣前稀釋10倍。以澳洲茄堿水解為澳洲茄胺為例，水解反應示意圖見圖1。

       2結果2.1提取方法的選擇文獻多采用回流法提取龍葵生物堿，該方法繁瑣費時。近年來，超聲提取法已被廣泛應用于中藥活性成分的提取。本實驗對這兩種提取方法做了系統比較，發現超聲提取簡單快速，且能達到相同的提取效率。此外，對龍葵生物堿的水解條件諸如溶液pH，甲醇含量，水解時間等進行了考察，獲得了上述優化條件（見“1.3溶液的制備”項）。

       2.2色譜條件的確定澳洲茄胺分子缺少共軛雙鍵結構，紫外吸收較弱，對其進行紫外檢測時只能要么進行衍生，要么選擇其末端吸收。當采用末端吸收波長進行檢測時，色譜流動相最好采用截止波長低的乙腈。但是，龍葵生物堿的色譜保留不強，如果采用洗脫強度大的流動相，勢必影響分離。同樣，由于采用末端吸收進行檢測，也不利于梯度洗脫，否則基線漂移嚴重。在大量實驗的基礎上，我們優選了“1.2”項所述的色譜檢測條件。如圖2所示，在該條件下，澳洲茄胺在真實樣品中獲得了良好的基線分離。

       2.3方法學驗證2.3.1標準曲線精密吸取澳洲茄胺儲備溶液0.5，0.8，1.0，2.0，2.5ml和3.0ml各置于5ml的容量瓶配成標準系列，按上述色譜條件進樣分析，在102～612μg/ml范圍內，對樣品濃度（X）與峰面積（Y）進行回歸分析，得回歸方程Y=689.52X 3.65，r=0.9999。

       2.3.2精密度實驗取上述供試品溶液20μl，在上述色譜條件連續進樣6次測定，澳洲茄胺峰面積的RSD為1.45%，符合含量測定要求。

       2.3.3回收率實驗精密稱取龍葵藥材6份，分為3組，依次按本底含量的50%，100%和150%加入澳洲茄胺對照品，按照供試品制備與測定方法，計算回收率。澳洲茄胺的平均回收率為96.0%，RSD=3.35%（n=6）。

       2.4樣品測定按照“1.3”項條件制備龍葵樣品溶液，依“1.2”項條件進樣分析，圖2-b是龍葵全草的典型色譜圖。按照外標法所得龍葵全草和成熟果實中的澳洲茄胺含量如表1。結果顯示，澳洲茄胺在龍葵果實中的含量明顯高于其在全草中的含量。

       3結論澳洲茄堿與澳洲茄邊堿是龍葵藥材中的主要抗腫瘤活性成分。它們主要以澳洲茄胺為苷元的生物堿苷的形式存在于龍葵中，其含量在龍葵果實中最高，全草次之。由于澳洲茄堿和澳洲茄邊堿與澳洲茄胺存在著一一對應的化學計量比關系，因此，以澳洲茄胺作為龍葵生物堿含量的評判指標是可行而且可靠的。本文所開發的方法簡單快速，準確可靠，可作為龍葵藥材及其制劑的質量控制方法。