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  • 高效液相色譜柱的選擇

    發布于 2014/08/15閱讀(2844)來源 hj1

    摘要

    高效液相色譜柱的選擇

    內容

    高效液相色譜柱的選擇

    一、硅膠基質填料  
    1、正相色譜

    正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。  由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。 

    2、反向色譜

    反向色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。 

          常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

     二、聚合物填料

          聚合物填料多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要優點是在PH值為1—14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。  三、其它無機填料 其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化由于其特殊的性質,一般僅限于特殊的用途。如,石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,由于在HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在PH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強,應用范圍受到一定限制,所以未能廣泛應用。新型色譜氧化鋯基質填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH1-14,溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行之中。

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