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  • PDS—1000\He型基因槍操作流程

    發布于 2011/07/11閱讀(2422)來源 zxj標簽 基因槍

    摘要

    PDS—1000\He型基因槍操作流程

    內容

    PDS—1000\He 型基因槍操作流程
    微彈的制備:
    1、EP管稱取60 mg (或3mg)金粉;
    2、加入1ml (或50ul)無水乙醇,振蕩1min,10000rpm離心10S;
    3、棄上清,加入1ml(或50ul) 無菌水洗,振蕩1min,10000rpm離心10S;
    4、棄上清,加入1ml(或50ul) 無菌水洗,振蕩1min, -20℃;
    DNA的包裹
    1、50ul金粉懸液于EP管;
    2、依次加入5ul/3ul質粒DNA(1ug/ul),50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亞精胺(每加完一樣可振蕩3S),靜置10min; 
    3、振蕩3S,冰上10min,10000rpm離心10S,棄上清;
    4、80ul無水乙醇,震蕩重懸,10000rpm離心10S,棄上清;
    5、10ul無水乙醇定容(重懸);
    6、每次用10ul點于微粒載膜中央,使其平鋪,晾至完全干燥,待用;
    基因槍的操作
    1、打開真空泵和基因槍的電源開關;
    2、打開氦氣瓶閥門,旋轉氦氣調節桿,使氣壓高于所選可裂膜壓力200psi左右;
    3、旋下可裂膜擋蓋,將可裂膜放在擋蓋中央,將擋蓋旋上,用專用板水平加固;
    4、把微粒發射裝置移出轟擊室,旋下蓋子,放入阻擋網,把微粒載片安裝在固定槽中(有微粒的一面朝下),旋上蓋子,將發射裝置放回轟擊室;
    5、將樣品盤放置在轟擊室的適當位置,關上轟擊室門;
    6、按VAC開關(上檔)抽真空,當表上讀數為所需值時,開關打到HOLD(下檔),然后按住FIER開關,當達到適當壓力可裂膜自動破裂,松開FIER開關;
    7、開關打到VENT(中間檔),以釋放轟擊室內的真空;
    8、打開轟擊室門,取出樣品盤;
    9、取出微粒發射裝置,卸下微粒載膜和阻擋網(阻擋網和微粒載膜放入70%的酒精浸泡);
    10、旋下可裂膜擋蓋,清除可裂膜碎片;
    11、若PDS—1000\He 型基因槍不再使用,關掉氦氣瓶的主閥,按住FIER開關,按住FIE開關,放掉氣體加速管內的氦氣壓力,最后關掉一切電源;

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