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  • HP1100液相色譜操作規程

    發布于 2011/05/23閱讀(1913)來源 zxj標簽 安捷倫儀器

    摘要

    液相色譜操作規程

    內容

    HP1100液相色譜操作規程


    超純水沖洗柱——流動相分離樣品——超純水沖洗柱——純乙睛保存柱
    1.電源準備
    打開穩壓器()電源開關,須待電壓指示至220V后,才能開啟其他有關設備。
    2.HP1100高效液相色譜儀的準備
    試劑:三氟乙酸
    乙腈(Fisher公司產品色譜純)
    超純水(Millipore超純水)
    冰乙酸
    溶液配置:貯液瓶與流動相的準備
    A液0.1%三氟乙酸(三氟乙酸1ml,超純水999ml)室溫保存
    B液60%乙腈(乙腈600ml,超純水400ml)室溫保存
    樣品液0.01%乙酸(冰乙酸10?l超純水100ml)室溫保存
    泵頭沖洗液:精濾后超純水或者是1%色譜純甲醇室溫保存
    注:貯液瓶應用超純水淌洗干凈,備用。
    流動相溶劑用潔凈G4玻沙漏斗精濾除去微小顆粒(目前未濾過溶液)。
    操作者必須清楚并注明A、B貯液瓶盛裝為何種溶劑。
    沖洗泵頭:用注射管于軟塑料管末端抽吸至有水流出,調節流速開關控制流速為20-30drop/min.(目前我們很少沖泵頭。)
    ①流動相管道排氣
    如果,管道中氣泡較多,可通過彈擊管道,排除氣泡,并逆時針旋轉脫氣泵活塞使其松動,用注射管于流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內氣泡排除完全。操作時,我們通常已經打開了脫氣機(氣泡嚴重影響分離效果,所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。)
    ②開機
    ③進入HP1100操作系統
    a.雙擊WIN-95操作界面中左下角Instrument1online圖標,進入HP1100工作站軟件操作界面。單擊工作站操作界面上方Runcontrol菜單,在下拉菜單中找到SampleInfo子菜單,單擊。在SampleInfo信息框內定義操作者、樣品前綴及編號、保存路徑等參數。在保存路徑項下,將可定義子目錄分別輸入操作者拼音縮寫,以方便檢索時互不干擾。
    b.等待工作站操作界面中泵、柱溫箱、檢測器各指示圖標由灰色轉變為綠色后,單擊泵、檢測器各圖標可從其各自彈出的菜單中設定流動相各溶劑比例、流速等。
    (1)流速通常為1ml/min。檢測波長通常為280,或者254nm。
    (2)A液設置為100%,運行15-30分鐘(目的是色譜柱的預平衡),觀察基線走勢,基線應為直線,通過單擊“Balance”鍵可將基線調至零點。待基線平穩后可進樣。
    (3)調整A液為0,B液為100%再運行60分鐘(此時乙腈實際濃度為60%)
    (4)在A液沖洗同時進行進樣環的沖洗:用500ul的針樣注射器,在load狀態,注入超純水500ul。(反復三次,若是20ul進樣環,則加入20ul以上,多余的水可廢液管流出。通常同一樣品上樣30次后應沖洗進樣環,如果不同樣品,最好,每次上樣前均進行沖洗。)
    (5)吸取一定量可直接進樣的樣品溶液(上樣液最好用濾器濾過),將進樣閥逆時針旋至Load檔,將進樣針從進樣孔處水平推入,按進樣器活塞將樣品溶液注射入進樣環后,立即將進樣閥順時針方向旋至Inject檔,與此同時,數據開始自動收集。
    (6)此時樣品分析已經完成。在HP1100主操作界面的檢測器圖標,關閉檢測器,然后關閉色譜儀主機檢測器開關(目的是延長檢測器壽命)。將B通道調為0,A通道調為100%,即A液沖洗色譜柱約10-30min。用A液續沖洗色譜柱約10-30m(目的是沖出柱內殘留的雜質)
    (7)A通道換為C通道(100%乙腈)續沖洗色柱約10-30min。(目的主要為保護柱)
    ④數據記錄的終止與保存
    電腦將自動收集并保存數據,終止運行后,將自動彈出數據框,或者可通過DATAANALYSIS菜單,調出資料。
    3.圖譜處理
    4.關機
    1)HP1100的關閉
    在HP1100的主操作界面上分別單擊關閉泵、檢測器圖標,或通過菜單關閉。然后,單擊HP1100的主操作界面右上方“X”,退出Instrument1online程序,返回至WIN-95操作界面。單擊左下角“Start”菜單,單擊“Shutdown”,等待關機,待出現“Restart”提示后,按電腦主機電源鍵,關閉電腦主機及顯示器。
    將所有使用儀器用布蓋好。關閉排氣扇、空調與穩壓器開關。
    2)清潔衛生
    實驗完畢后,打掃儀器室桌面與地面清潔,保持桌面整潔。
    3)儀器使用記錄
    記錄當天的儀器使用情況于指定記錄本上,包括儀器使用起止時間與出現問題的解決方案,并簽上操作者的名字。

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