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  • 高效液相色譜法測定石杉堿甲膠囊的含量

    發布于 2011/08/23閱讀(1798)來源 zxj標簽 液相色譜儀

    摘要

    高效液相色譜法測定石杉堿甲膠囊的含量

    內容

    高效液相色譜法測定石杉堿甲膠囊的含量

     

    摘要建立了測定膠囊中石杉堿甲含量的反相高效液相色譜法。SpherisorbC18分析柱,以甲醇—水(50∶50,含0.02%的三乙醇胺)作為流動相,在310nm波長檢測。石杉堿甲在0.2~50μg/mL濃度范圍線性關系良好。最小檢測量為1.2ng,方法重現性好,平均回收率為99.59%(n=6),RSD=1.6%。本法操作簡便、精確。
      
      石杉堿甲是我國首先分離得到的一種新生物堿,是一種強效的可逆性AChE抑制劑,能改善老年性記憶功能減退,可顯著提高AD患者的記憶、認知和行為功能,無明顯不良反應,是治療阿耳茨海默病的一個有前景的藥物。石杉堿甲片劑的含量測定采用提取—紫外分光光度法,操作繁復,結果往往偏低。本文采用高效液相色譜法測定了石杉堿甲的含量,表明方法簡便、準確,重現性好,結果令人滿意。
      
      1、儀器與試藥
      
      高效液相色譜儀(本昂儀器P1201);紫外檢測器;甲醇(HPLC級);三乙醇胺(AR級);重蒸餾水;石杉堿甲對照品(純度為99.6%)及膠囊(寧波立華制藥有限公司)。
      
      2、高效液相色譜定量方法和結果
      
      2.1色譜條件色譜柱:SpherisorbC18,250mm×4.6mm,10μm;流動相:甲醇—水(50∶50),含0.02%的三乙醇胺;檢測波長:310nm;柱溫:40℃;流速:1.0mL/min;進樣量:20μL。
      
      2.2溶液的配制石杉堿甲對照品溶液:精密稱取80℃烘至恒重的石杉堿甲對照品10mg,置100mL量瓶中,加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,精密吸取5mL,置100mL量瓶中,加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,即得石杉堿甲對照品溶液。取石杉堿甲膠囊20顆,內容物研勻。取約200mg精密稱定,置10mL量瓶中,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度,過濾(0.45μm),備用,即得供試品溶液。
      
      2.3線性范圍精密吸取石杉堿甲對照品液,加0.01mol/L鹽酸溶液配制成0.2、0.4、1、2、4、8、10、25、50μg/mL的溶液,按上述色譜條件,分別進樣20μL,以石杉堿甲對照品濃度(μg/mL)為橫坐標,主峰面積為縱坐標,進行線性回歸,得標準曲線:
      
      Y=7784.9X-178.0r=0.99998
      
      線性范圍0.2~50μg/mL。
      
      2.4回收率測定按處方量稱取空白輔料約200mg,精密加入石杉堿甲對照品約50μg(一式6份),置10mL量瓶中,加0.01mol/L鹽酸溶液,溶解并稀釋至刻度,經0.45μm濾膜過濾,進樣20μL。計算回收率和相對標準偏差。結果,石杉堿甲平均回收率為99.59%,RSD=1.6%(n=6)。
      
      2.5空白試驗僅加入輔料成分,按回收率試驗項下操作,結果在對照品的出峰時間不出現色譜峰。輔料對主藥測定無干擾。
      
      2.6重現性試驗按樣品的測定方法測定同一批樣品,結果含量平均值為標示量的97.15%(n=6),RSD=1.2%。
      
      2.7穩定性試驗精密吸取供試品溶液20μL,分別于0、1、2、4d時進樣測定其峰面積,計算,RSD=0.8%,說明樣品穩定性好。
      
      2.8樣品的測定取供試品溶液和石杉堿甲對照品溶液,分別精密量取上述2種溶液20μL,注入儀器,記錄色譜圖,測量對照品(r)和供試品(x)待測成分的峰面積,按外標峰面積法計算含量。測定3批樣品,結果為標示量的95.56%~97.15%。
      
      3、討論
      
      3.1流動相的選擇石杉堿甲為生物堿成分,選擇以甲醇—水系列為流動相,經試驗甲醇—水各種配比(90∶10、80∶20、50∶50),在30min內均不出峰,而在甲醇—水(50∶50)中加入少許三乙醇胺,使流動相呈弱堿性,則獲得適宜的保留時間。
      
      3.2檢測波長的確定取石杉堿甲對照品,以流動相為溶媒,制成適宜濃度,于紫外200~400nm掃描,結果在310nm處有最大吸收,故確定檢測波長為310nm。
      
      3.3小結實驗表明,本法測定石杉堿甲膠囊含量,樣品穩定,重現性好。并且線性范圍廣、靈敏度高,可用于該制劑溶出度、含量均勻度測定。本法中輔料對測定無干擾,無需樣品預處理,結果準確可靠。


     

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